Cinco novos alcalóides quinolizidínicos foram isolados das folhas de Cylicomorpha solmstii e denominados ciclomorfinas A-E. Os compostos foram elucidados por espectroscopia de RMN e apresentaram estruturas de ésteres de álcool quinolizidínico. O composto 5 mostrou atividade citotóxica contra células de câncer colorretal HCT-116.
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Alcaloides de quinolizidina de cylicomorpha solmsii
1. Mestranda: Raquel Vieira de Oliveira Leal
Professores: Prof. Dr. Bruno Júnior Neves
Profa. Dra. Danielle Guimarães Almeida Diniz
Prof. Dr. Matheus Lavorenti Rocha
Orientador: Prof. Dr. José Realino de Paula
UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS
Curso: Programa de Pós Graduação em Ciências Farmacêuticas
Seminários I
Junho de 2021
Unidade Acadêmica: Faculdade de Farmácia
4. Introdução
• Caricaceae América do Sul e África
⚬ Carica papaya L. (mamão).
￭ Cylicomorpha solmsii (Urb.) Urb.
• Dióica, atinge 25m de altura.
• Encontrada em florestas tropicais montanhosas
em altitudes de 1000–1400 m.
• Característica:
⚬ Espinhos cônicos curtos e pontiagudos.
• Folhas: lobadas digitalizadamente
• Seiva: Leitosa branca
• Uso medicinal no país Camarões
⚬ Decocção - via oral
￭ Dores no peito em crianças
￭ Gonorreia http://www.xper3.fr/xper3GeneratedFiles/publish/identification/-
3467035030077618581/mkey.html
Canva,
2021
3
5. Material vegetal
Cylicomorpha solmsii (Urb.) Urb.
Yaoundé,
Camarões
15/04/2014
900m
Herbário Nacional de Camarões
Tchengue B.3828
Coleta
Identificação
Colina Eloumden
4
6. Extração e isolamento dos compostos
C. solmsii - 886g
Pulverizadas
maceradas
MeOH
Filtração
Rotaevaporador
41g extrato bruto
41g + 2L de HCl a 5%
2 extrações EtOAc
Fase 1 Fase 2
Na2CO3
pH 11
2 extrações
2Lt. de
CH2Cl2
CH2Cl2
lavada e [ ]
à vácuo
2,4g
residual
80g
sílica gel CC
45 frações
TLC
7 frações
(frs.1-7).
5
7. Determinação das
rotações ópticas:
Solução de MeOH em
um polarímetro
automático
PerkinElmer 341.
Os espectros de UV
MeOH usando um
espectrofotômetro
SAFAS UV mc 2 .
Espectroscopia de IV
Espectrofotômetro
FT-IR Bruker Tensor
27.
Espectros de RMN
Espectrômetro
Bruker Avance II
Procedimento experimental
Experimentos 2D
Programas Bruker
padrão.
Dados ESIMS e
MS/MS
Espectrômetro de
massa de armadilha
de íons Bruker
Esquire-LC
Obtenção dos
dados HRESIMS
Bruker
MicroTOF.
TLC
Sílica gel pré-revestido
60F 254(Merck) com
CH2Cl2–MeOH (8: 2)
Reagente Dragendorff
6
8. Cromatografia em
coluna (CC)
Cartucho pré-embalado
Kieselgel (30 μm) com
CH2Cl2 –MeOH.
HPLC analítico
Merck-Hitachi
HPLC
semipreparativa
Aparelho equipado
com uma bomba
Waters 600
Os espectros de
infravermelho (IR) e
VCD
Bruker PMA 50
Espectros de
absorção de IV
Célula preenchida
com CD2Cl2 -
referência.
7
9. Resultados e discussão
• Reagente de Dragendorff
⚬ Cinco alcalóides corados de laranja brilhante em placas de TLC.
• Seus espectros de 1H RMN - zonas de alto campo semelhantes.
• Espectros de 13C RMN - pouca variação nas regiões de 0-80 ppm.
• A partir dos dados RMN de H
⚬ Concluíram que os alcalóides eram ésteres do mesmo álcool:
• benzoato
• 3,4-dimetoxibenzoato
• 4-metoxibenzoato
• ( E )-cinamato
• 4-metoxi-( E )-cinamato
8
11. • Experimento de COSY COrrelation Spectroscopy
3 metinos átomos de C
substituídos por N
conformacionalmente
bloqueadas
Indica quais átomos de H estão acoplados
C não pertencentes à porção éster formam
uma única unidade de 12 carbonos
• Ressonância 52,0
sugerindo a presença
de quinolizidina
• Tans-quinolizidina Blindagem do metino
angular - δH 2,64, H-10
acoplamento
frequente 10
Alceno
12. Provando que os
dois substituintes
do anel A
Trans-diaxiais
Correlação espacial NOE
com
Axial angular H-10
e
deslocamento químico de
C13 em RMN
metila
e
éster
• Metil secundário
Axial
Ressonância de
7,9 do C11
• Posição equatorial Análise padrão de
acoplamento H-6
CH2CO2
6
2,8
11
2,8
12 - CH2
7 - CH2
Hz Axial-axial a um
anel de 6
membros
H-6 é axial e os
dois átomos de
carbonos
equatorial
11
14. Confirmação da atribuição dos deslocamentos químicos
Em piridina- d 5 para a mistura de reação em bruto e em CDCl 3 após a purificação
13
15. Hipótese biossintética para a formação das
ciclomorfinas
14
• Adição de Michael ou Ciclização intramolecular
• Síntese de clavepictinas – ciclomorfinas.
16. Ensaio de citotoxicidade
15
• Células HCT116 comerciais
• Análise de dados:
⚬ Prism 4.03 para gerar
valores de EC50.
⚬ Concentração necessária
para diminuir 50% da
viabilidade celular.
17. Ensaio de citotoxicidade
• Células HCT116 comerciais
• Análise de dados:
⚬ Prism 4.03 para gerar
valores de EC50.
⚬ Concentração necessária
para diminuir 50% da
viabilidade celular.
15
18. Conclusão
• Cinco novos alcalóides quinolizidínicos foram isolados das
folhas de Cylicomorpha solmstii (Urb.) Urb. (Caricaceae) e
denominadas ciclomorfinas A – E (1-5).
• Substituintes de ácido hidroxilado, metílico e etanóico.
• Estruturas:
⚬ Espectroscopia de RMN.
• Configuração proposta:
⚬ Base em dados de VCD e derivatização de éster Mosher.
• Citotoxicidade:
⚬ Composto 5 HCT-116.
16
19. Referências
(1) Fonge, B. A.; Egbe, E. A.; Fongod, A. G. N.; Focho, D. A.; Tchetcha, D. A.; Nkembi, L.; Tacham, W. N. J. Med. Plants Res. 2012,
6, 855−865.
(2) Tshiamala-Tshibangu, N.; Ndjigba, J. D. Tropicultura 1998, 16, 70−79.
(3) Dewick, P. M. Medicinal Natural Products: a Biosynthetic Approach, 3rd ed.; Wiley, 2009; p 329.
(4) Gribble, G. W.; Nelson, R. B. J. Org. Chem. 1973, 38, 2831−2834.
(5) (a) Bünnemann, K.; Pollok, C. H.; Merten, C. J. Phys. Chem. B 2018, 122, 8056−8064. (b) Polavarapu, P. L.; Donahue, E. A.;
Hammer, K. C.; Raghavan, V.; Shanmugam, G.; Ibnusaud, I.; Nair, D. S.; Gopinath, C.; Habel, D. J. Nat. Prod. 2012, 75,
1441−1450. (c) Batista, J. M.; Batista, A. N. L.; Rinaldo, D.; Vilegas, W.; Ambrosio, D. L.; Cicarelli, R. M. B.; Bolzani, V. S.; Kato, M.
J.; Nafie, L. A.; Lopez, S. N.; Furlan, M. J. Nat. Prod. 2011, 74, 1154−1160.
(6) Su, B. N.; Park, E. J.; Mbwambo, Z. H.; Santarsiero, B. D.; Mesecar, A. D.; Fong, H. H.; Pezzuto, J. M.; Kinghorn, A. D. J. Nat.
Prod. 2002, 65, 1278−1282.
(7) Raub, M. F.; Cardellina, J. H., II; Choudhary, M. I.; Ni, C.-Z.; Clardy, J.; Alley, M. C. J. Am. Chem. Soc. 1991, 113, 3178−3180.
(8) Kong, F.; Faulkner, D. J. Tetrahedron Lett. 1991, 32, 3667−3668.
(9) (a) Toyooka, N.; Yotsui, Y.; Yoshida, Y.; Momose, T.; Nemoto, H. Tetrahedron 1999, 55, 15209−15224. (b) Toyooka, N.;
Yotsui, Y.; Yoshida, Y.; Momose, H. J. Org. Chem. 1996, 61, 4882−4883.
(10) Randl, S.; Blechert, S. Tetrahedron Lett. 2004, 45, 1167-1169.
(11) Kusano, G.; Orihara, S.; Tsukamoto, D.; Shibano, M.; Coskun, M.; Guvenc, A.; Erdurak, C. S. Chem. Pharm. Bull. 2002, 50,
180-192.
(12) Bolzani, V. d. S.; Gunatilaka, L. A. A.; Kingston, D. G. I. Tetrahedron 1995, 51, 5929-5934.
(13) Christophidis, I.; Welter, A.; Jadot, J. Tetrahedron 1977, 33, 977-979.
(14) Agami, C.; Couty, F.; Evano, G.; Darro, F.; Kiss, R. Eur. J. Org. Chem. 2003, 2003, 2062-2070.
(15) Bunsupa, S.; Yamazaki, M.; Saito, K. Front. Plant Sci. 2008, 3 DOI: 10.3389/fpls.2012.00239.
(16) Stork, G.; Shiner, C. S.; Winkler, J. D. J. Am. Chem. Soc. 1982, 104, 310-312.
(17) Massiot, G.; Mulamba, T. J. J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1984, 715-716.
(18) Ha, J. D.; Cha, J. K. J. Am. Chem. Soc. 1999, 121, 10012-10020.
17
20. Artigo X projeto
Coleta;
Identificação botânica;
Extração;
Análises físico químicas;
Elucidação das estruturas químicas:
RMN
HPLC
cromatografia
16
