Deuxième Partie :
CADRE, MATÉRIEL ET MÉTHODES
1. Cadre
Ce travail a été effectué au sein du
laboratoire d'extraits végétaux et arômes naturels (LEVAN)
du département de chimie, à la faculté des sciences de l'
Université de Lomé. C'est un laboratoire qui s'occupe de
l'extraction et de la caractérisation des huiles essentielles, ainsi que
d'autres extraits totaux des plantes médicinales. Ce travail s'inscrit
dans le programme de recherche sur les huiles essentielles extraites des
plantes aromatiques tropicales et d'autres plantes médicinales de la
même région.
2. Matériel
2.1. Matériel végétal
Ce travail a porté sur 3 espèces de plantes
à huiles essentielles suivantes :
- Hyptis spicigera : cette
espèce a été récoltée à Aou- Losso
dans la Préfecture de Tchaoudjo,
- Pluchea ovalis et Laggera aurita: les deux
plantes ont été récoltés à Kpomé dans
la Préfecture des Lacs.
La biomasse utilisée pour la distillation était
constituée de la plante toute entière pour toutes les trois
espèces. Les photos de toutes les trois plantes se trouvent à la
page suivante.
Photo 1. Pieds d' Hyptsis
spicigera
Photo 2. Pluchea ovalis
Photo3. Laggera aurita
2.2. Matériel de laboratoire
Le matériel de laboratoire est constitué d'un
appareillage constitué d'un :
- dispositif d'extraction, voir photo n° 4.
- chromatographe en phase gazeuse du type GC Varian
3 400 muni d'un détecteur à ionisation de flamme (DIF),
- réfractomètre pour mesurer les indices de
réfraction.
Figure 6. Schéma d'un chromatographe en
phase gazeuse muni d'un détecteur
à ionisation de flamme.
2.3. Méthodes
2.3.1. Extraction
L'huile essentielle est extraite par la méthode
d'entraînement à la vapeur. Sur un ballon contenant de l'eau mise
en chauffage, on monte un alambic dans lequel on place la biomasse pesée
fraîche ou sèche. La vapeur d'eau traverse le matériel
végétal en entraînant les produits volatils vers la colonne
de condensation. La vapeur condensée est le mélange d'eau et de
l'huile essentielle. Celle-ci est recueillie dans une burette contenant de
l'eau distillée. L'huile est séparée de l'eau par
décantation. La photo 4 illustre le dispositif d'extraction au
laboratoire.
Photo
4. Dispositif d'extraction au laboratoire (LEVAN).
2.3.2. Le rendement
Le rendement est le rapport de la quantité d'huile
recueillie après distillation sur la quantité de la biomasse,
exprimée en pourcentage. Les quantités d'huile essentielle
proviennent du cumul d'au moins cinq distillations. Pour ce qui concerne
Pluchea ovalis, nous avons essayé de suivre l'effet de
séchage sur le rendement d'extraction.
2.3.3. Indice de réfraction
Les indices de réfraction sont mesurés à
l'aide d'un refractomère (AFNOR, 2000) à
la température ambiante puis ramenés à 20°C par la
formule : N20 = Nt+ 0,00045 (T-20°C)
où
N20 : indice à 20°C,
Nt : indice à la température
ambiante ou de mesure
T : température ambiante ou de mesure
Les produits étalons de qualité pour
réfractométrie servant à ajuster le
réfractomètre sont les suivants (les indices de réfraction
à 20°C sont données dans la parenthèse) :
- eau distillée (1,333)
- p-cymène (1,4906)
- benzoate de benzyle(1,5685)
- Bromo-1 naphtalène(1,6585)
2.3.4. Analyses par chromatographie en phase gazeuse
(CPG)
Les analyses chromatographiques ont été faites
sur un chromatographe type Varian 3400 muni d'un détecteur FID et d'un
injecteur split/ splitless. La colonne utilisée est du type DB-5 de 30 m
de long et de 0,25 mm de diamètre intérieur. La phase
stationnaire a une granulométrie de 0,25 m. Le gaz vecteur est de
l'azote N50 avec un débit de 1 ml/min. La flamme du
détecteur était entretenue par un mélange
hydrogène/ air à des débits respectifs de 30 et 300 ml/
min.
Ci- après les conditions d'analyse :
§ Température de l'injecteur :
250°C ;
§ température du détecteur :
350°C ;
§ gradient de température : 40 à
200°C à 2°C/ min et de 200 à 250°C à
5°C/min pendant 15 min
§ la durée totale d'une analyse est de 109 min.
Les composés ont été identifiés
à partir de leurs indices de Kovats.
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